유전자 조작 거미에 물려 특별한 능력을 갖게된 피터 파커(토비 맥과이어)는 모두에겐 영웅이지만 자신에겐 어려운 일투성이다. 스파이더맨의 신분을 감춰야 하는 피터 파커는 사랑하는 메리 제인(커스틴 던스트)과의 약속을 펑크내기 일쑤고, 그런 피터에게 지친 메리 제인은 편집장의 아들과 연인이 된다. 친구 해리(제임스 프랭코)는 스파이더맨이 아버지를 죽였다면서 복수를 벼른다. 한편 피터가 존경하는 핵물리학자 옥타비우스 교수(알프레드 몰리나)는 실험 중의 사고로 인해 기계 촉수를 휘두르는 악의 화신 닥터 옥토퍼스로 거듭난다. 과학재단을 운영하는 해리는 닥터 옥토퍼스에게 절실한 트리늄을 빌미로 거절 못할 제안을 한다. 이로 인해 도시 전체가 걷잡을 수 없는 위험에 휘말리게 되는데… 

[DISC 1: 4K UHD BD (극장판 수록)]
- 오디오: 영어 DOLBY ATMOS (DOLBY TRUEHD 7.1 COMPATIBLE), 영어 5.1 DTS-HD MASTER AUDIO, 체코어 5.1, 프랑스어 5.1, 독일어 5.1, 이탈리아어 5.1, 일본어 5.1, 폴란드어 5.1, 포르투갈어 5.1, 러시아어 5.1
- 자막: 한국어, 영어, 영어 SDH, 중국어, 체코어, 덴마크어, 네덜란드어, 핀란드어, 프랑스어, 독일어, 그리스어, 헝가리어, 이탈리아어, 일본어, 리투아니아어, 노르웨이어, 폴란드어, 포르투갈어, 루마니아어, 러시아어, 스웨덴어, 태국어, 터키어
- 화면비율: WIDESCREEN 2.40:1
- 디스크 타입: UHD-66

[DISC 2: BD (확장판 & 극장판 동시 수록)]
- 오디오: 영어 5.1 DTS-HD MASTER AUDIO, 일본어 5.1, 태국어 5.1, 영어 2.0
- 자막: 한국어, 영어, 중국어, 일본어, 태국어
- 화면비율: WIDESCREEN 2.40:1
- 디스크 타입: BD-50 DUAL LAYER